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包装规格：500 Assays 产品简介 BCA 法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与 Cu 2+ 络合并将 Cu 2+ 还原成 Cu 1+ 。BCA 特异地 与 Cu 1+ 结合形成稳定的紫蓝色复合物，在 562 nM 处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正 比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高，操作简单，并且受干扰物质去垢剂等影响小。 产品特点 1. 准确灵敏，线性范围广，BCA 试剂的蛋白质测定范围是 25~500μg/mL 。 2. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。 3. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝，线性关系良好。 运输和保存条件 在常温下运输，收到后将溶液 A 和溶液 B 4°C 保存，BSA 蛋白标准液-20°C ，保质期两年。 试剂盒组成 组分 溶液 A 100 mL 溶液 B 2 mL BSA 标准蛋白 5 mg/mL 1 mL 操作步骤 A 试剂准备 1. 按照以下公式计算所需的 BCA 工作液总体积。 BCA 工作液总体积= （标准曲线测定点数+ 样品数）× 重复次数× 每个样品所需的 BCA 工作液体积。 2. 根据所需的 BCA 工作液总体积，定量取溶液 A ：溶液 B=50 ：1 ，混匀，制成 BCA 工作液。 3. 取一定量的 B A 标准溶液，用 1XPBS(137mM NaCl, 2.7mM KCl, 8mM Na 2 HPO4Ÿ7H2O, 1.5mM KH 2 PO4, pH 7.4 ) 溶 液稀释为 500 μg/mL 。 4. 取 取 16 支 支 1.5 mL 离心管，设置为 8 个重复管号，按照下表平行操作。 5. 将样品用 1XPBS 做适当倍数的稀释备用。 溶液管号 0 1 2 3 4 5 6 7 1×PBS (μL) 300 285 270 240 180 120 60 0 0.5 mg/mL BSA (μL) 0 15 30 60 120 180 240 300 BSA 浓度(μg/mL) 0 25 50 100 200 300 400 500 B. 分光光度法 1. 取 取 20 支 支 1.5 mL 离心管，分为标准组和样品组。其中 16 支 支 1.5 mL 离心管，每个标准品设置 1 个重复，各管分别加 入 100μL 相应浓度的标准蛋白质溶液；剩余 4 支 支 1.5 mL 离心管，分为 2 个重复组，重复组离心管编号相同。其中编号 不同的两管加入浓度不同的 100 μL 样品稀释液。 2. 各管加入 1 mL BCA 工作液，迅速混匀。 3. 在 在 37°C 水浴中保温 30 min 。 4. 冷却至室温后，在分光光度计上测各管的 A562 值。 5. 以标准组各管 A562 平均值为纵坐标，对应的蛋白质浓度为横坐标，在坐标纸上或 Microsoft Excel 软件中绘制标准曲 线。 6. 根据两个相同样品稀释液 A562 值的平均值，在标准曲线上计算出该样品经过稀释后的蛋白质浓度。选择合适稀释度 的样品计算最终的样品蛋白浓度，再由稀释倍数计算原样品蛋白质浓度。 C. 酶标板法 1. 选取酶标板上 20 个孔，分为标准组和样品组。其中 16 个孔，每个标准品设置 1 个重复，各孔分别加入 20μL 相应浓度的标 准蛋白质溶液；剩余 4 孔，分为 2 个重复组，重复孔编号相同。其中编号不同的两孔加入浓度不同的 20μL 样品稀释液。 2. 各酶标孔加入 200 μL BCA 工作液，迅速混匀。 3. 在 在 37°C 水浴中保温 30 min 。 4. 冷却至室温后，在酶标仪上测各孔的 A562 值。 5. 以标准组各孔 A562 平均值为纵坐标，对应的蛋白质浓度为横坐标，在坐标纸上或 Microsoft Excel 软件中绘制标准曲 线。 6. 根据两个相同样品稀释液 A562 值的平均值，在标准曲线上计算出该样品经过稀释后的蛋白质浓度。选择合适稀释度 的样品计算最终的样品蛋白浓度，再由稀释倍数计算原样品蛋白质浓度 注意事项 1. 试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或 37 °C 温育使其溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。 2. 当溶液 A 、B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，BCA 工作液建议现配现用。 3. 样品检测后的 A562 值应在标准曲线范围之内，若超过此范围则需将样品酌情稀释或浓缩。 4. BCA 法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保蛋白中残留的 EDTA 低于 1 mM ，无 EGTA ，二硫苏糖醇低于 1 mM ，β- 巯基乙醇低于 0.01% 。不适用常规 BCA 法时建议使用上海生工生产的改良型 BCA 法蛋白浓度测定试剂盒或 改良型 Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒或非干扰型蛋白质定量试剂盒。 5. 当样品中含有儿茶酚氨类等生物氨或者脂、脂蛋白或自由巯基等还原试剂时时，也会使得光吸收值升高，在含铜离子 螯合试剂时，可以使的吸光度降低，这时可以用 DOC-TCA 法沉淀祛除。 6. 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。 |
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